1.能够事前核算蛋白浓度,20-30UG/次/WELL.2.可是仍要做ACTIN确保你上的样量相同.3.假如你只需定性即有或无,就没比要顶量.不然,至少要做3次一上(包含ACTIN). 才干顶量.ACTIN 是必需的.不然PAPER 不接受.

　　western是不需要内参的，因为那样计算起来没有好的计算办法，再说内参的出片是个问题！我的经历，这是国家重点试验室的经历呀！有什么不了解能够联络呀！

　　上样前定量是为确保各样品之间总蛋白量共同，然后检测方针蛋白在各样品中的改变。因为western自身会遭到多种要素的影响，并不是很准确，所以看方针蛋白的量的改变，只能看个大体趋势，也便是所谓的半定量。一起，还能够检测一些内参蛋白（不受你的试验处理影响的蛋白）如tubulin或B－actin ,以显现你的各样品上样量共同，阐明你的方针蛋白的量的改变不是因为上样量不共同引起的，而确实是因为对各样品的处理不同引起的。

　　sunyanxiang 的意思我不太了解, 但关键是要加一个内参对照(B－actin )!就像做PCR相同! 不知是否了解错了?

　　请教上一楼一个问题：假如上样前定量并不能代表样品蛋白的实在含量，那这个定量是不是没有意义了呢？

　　november12 说的对，上样没有定量和半定量的说法。咱们在上样之前进行先进行定量，其实这也仅仅一个相对的定量，不能代表样品立蛋白的实在含量。

　　我现已跑了两年多的western了，但从没听过上样时有定量和半定量之说，一般都说某种试验办法是定量的仍是半定量的，严厉的说，western的成果只能算是半定量的，至于暴光后条带怎样定量强弱，它首要要被扫描到核算机中，然后经过特别软件就能够做剖析了。